Olink项目文章（IF 27.973）|基于泼尼松联合mTOR抑制剂西罗莫司治疗腹膜后纤维化的临床研究

腹膜后纤维化（RPF）是一种罕见的自身免疫性疾病，在腹膜后有纤维组织生长并伴随炎症反应发生。目前常见的治疗方法是长期服用糖皮质激素（如泼尼松）来控制炎症，然而，副作用很常见，但减少剂量后又会导致疾病频繁复发。因此，寻找更安全、副作用更小的药物便极为重要。

本研究作者通过基因-疾病-药物数据库，发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是 RPF 中的关键信号蛋白，而mTOR 抑制剂西罗莫司影响许多RPF 通路，由此设计了一种临床疗法，将逐渐减少剂量的泼尼松与长期稳定剂量的mTOR 抑制剂西罗莫司相结合。而后作者实施了一项单臂临床试验，评估了 8名 RPF 患者在第 0、12 和 48 周时的治疗效果。通过CT监测纤维组织大小，生化实验室检测炎症和肾功能的标志物以用于评估药物副作用，流式细胞仪检测免疫细胞类型和丰度， Olink蛋白质组学检测血浆炎症蛋白的丰度。

结果显示，联合治疗后，患者纤维化组织缩小一半左右，急性炎症标志物减少70%，大部分肾功能异常患者恢复正常。在分子方面，包括TH2，TH17和cTFH细胞在内的纤维化相关T细胞亚群减少，肿瘤坏死因子和相关细胞因子恢复到健康水平，并且没有观察到严重的长期副作用。

因此，作者认为此联合疗法能够显著缓解纤维化，并且可使免疫系统向健康状态整体回归，同时实现良好的耐受性。或许在未来，这种新疗法有可能取代类固醇单一疗法来治疗RPF。

1. mTOR 途径在 RPF 中被高度激活

作者在搜索基因-疾病-药物数据库后，鉴定到了一些富含细胞毒性/激酶途径和细胞因子/趋化因子途径的基因（调整后的 p<0.05），对所有基因的汇总分析后，揭示了关键信号通路，包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 通路及其相关的phosphoinositide-3-kinase (PI3K)- Akt 通路。为了验证此发现，作者利用mTOR 及其两个直接下游信号分子，mTOR-complex 1 中的phospho-S6K (p-S6K) 和 mTOR-complex 2 中的phospho-AKT (p-Akt)进行免疫组化染色：以纤维化最密集并伴有T细胞和B细胞高度浸润的纤维组织中心(GCs)，以及靠近GCs的外周组织作为实验组，以非纤维化组织作为对照。结果显示在GCs或外周观察到>90% 的细胞被mTOR染色。p-S6K在对照组中染色程度较低，在GCs中染色程度较高；相比之下，p-Akt 在对照组和实验组中的结果不明显。因此，得出结论，mTOR-complex 1 在纤维化组织中被高度激活。

2. RPF症状通过联合治疗得到改善

通过联合治疗，大多数RPF症状显示出改善。CT扫描显示，在12周和48周的治疗中，纤维化组织的轴向直径和厚度都缩小了近一半。两个急性炎症的标志物，CRP和ESR，减少了70%-80%。肾脏功能的两个标志物，Scr和eGFR，在治疗过程中也显示出持续的改善。联合治疗还缓解了RPF患者的贫血症状，血红蛋白浓度提高了约12%。研究还发现，治疗后IgG4下降了40%-50%，这表明它对治疗IgG4+RPF 也有效。基于此现象作者还分析了免疫球蛋白的其他类型，发现除IgG在治疗过程中明显减少外，IgE、IgM和IgA并没有显示出明显的变化。

3. 免疫细胞类型和丰度情况

作者通过流式细胞术对外周血中的七个T细胞亚群进行了全面的免疫表型分析。在治疗过程中，观察到TH2，TH17 和cTFH 细胞丰度减少，但 TH1 未见变化。TH2，TH17细胞分别是产生 IL-4 和产生 IL-17 的 CD4+T 细胞，并且cTFH 细胞在GCs的发育和抗体生产中发挥重要作用。

4. 利用olink技术检测治疗过程中的炎症蛋白的丰度

作者使用96-plex inflammatory panel进行静脉血中蛋白进行检测，共鉴定了 75 种蛋白。25 种蛋白质显示出相对于对照组的疾病状态变化，包括肿瘤坏死因子 (TNF)、白细胞介素和趋化因子（t 检验，调整后的 p<0.05）。治疗后，其中 6 种恢复到健康水平，即 CCL23 、OSM 、TNF 、TNFRSF9 、TRAIL 和VEGFA。值得注意的是，RPF 中大多数处于健康水平的蛋白质在治疗结束时仍保持稳定（t 检验，调整后的 p<0.05）。也有少部分蛋白质，例如AXIN1、CCL20、CXCL1、CXCL5、FGF-2和SIRT2在疾病状态下表现正常，但在治疗后偏离正常，这些变化有可能归因于药物副作用（75 人中有 6 人，8%）。作者对25种对治疗有反应的炎症蛋白进行了 KEGG 通路富集，发现它们大多富集在细胞因子、趋化因子和其他免疫相关信号通路中（图 4B).