平台服务-转录组-mRNA/lncRNA/circRNA定量

mRNA/lncRNA/circRNA定量介绍

mRNA/lncRNA/circRNA实时定量PCR检测是高通量筛选后验证的必选实验,基于qPCR检测技术的RNA表达与差异分析是对测序、芯片结果的有效补充和验证,是确定研究对象并进行后续功能研究或生物标志物发现的有效手段。上海伯豪生物根据不同RNA的特性,提供专业的引物设计和qPCR平台,可有效保障检测数据的准确性和可靠性,可检测包括细胞、组织、血液和外泌体等多种样本中RNA差异表达情况。

 

伯豪特色

2008年9月,SHBIO和ABI正式签订了相关协议,决定在定量PCR服务方面展开全面合作。SHBIO将利用ABI公司在全球享有盛誉的7500和7900定量PCR仪以及相关试剂,如TaqMan探针、Power SYBR Green等为中国的生命科学和生物医药产业提供优质、可靠的服务。
上海伯豪生物技术有限公司采用SYBR Green染料法和TaqMan探针法提供专业的实时荧光定量PCR技术服务,以相对定量检测为主。上海伯豪采用严格的质量控制操作流程,完善的预实验方案等确保引物的特异性和结果的准确性;同时,公司提供人性化的技术服务,得到结果后会提供完整的实验报告,也会根据您的需要为您提供报告解读和实验讨论服务。

 

引物设计

  1. 设计区域选择的合理性:一般选择相对稳定的3’端,也可根据芯片或者高通量测序结果,选择合适的引物设计区域,比如覆盖或者靠近探针序列,使验证的结果更准确,吻合度更高等;
  2. 严格的设计要求:采用Primer Express 3.0.1软件进行专业的引物设计,严格要求引物的Tm值、GC%、二级结构等参数,提高引物的成功率;
  3. 特异性:设计过程中,通过blast比对,确保引物只有唯一的特异产物,从而得到准确的结果,其中,特别关注mRNA和lncRNA的同源序列,避免相互影响;
  4. 人性化服务:引物通过预实验确定结果的准确性和特异性,失败的基因会及时跟客户反馈,可提供二次设计或者替换;
  5. circRNA引物设计:上海伯豪生物为您提供专业的环状RNA引物设计,针对circRNA拼接位点,设计跨接头的引物,排除线性RNA的干扰,确保结果的特异性和准确性。

 

TaqMan和SYBR Green实时定量PCR法的比较

 

服务流程

方案设计——合同签订与送样——样本抽提和质检——RNA反转录——引物设计与合成、预实验——反馈预实验结果并调整实验——正式PCR实验——数据分析

 

样本要求

  1. 浓度>10ng/μl,总量>500ng(基因数增加,起始量增加);
  2. RIN>=7.0,28s/18s>=0.7;
  3. OD260/280=1.8-2.1,OD260/230>1.7;
  4. 无真核或原核生物污染,无DNA或蛋白污染。

 

仪器平台

  1. ABI 7500 Real-Time PCR System;
  2. ABI 7900 HT Sequence Detection System。